Determinación de Reductasa
en la Leche
1. Objetivos
1.1 General
Determinar
Reductasa en la leche adicionando azul de metilo.
1.2 Específicos
- Analizar el cambio de color que presenta la leche cuando se le
adiciona azul de metilo.
- Controlar el tiempo este cambio de coloración.
2. Marco Teórico
2.1 Reductasa en la leche
En la leche debe hacerse distinción
entre la Reductasa generada por los microorganismos presentes y cuya actividad
aumenta a medida que éstos aumentan, por lo que sirve para controlar el estado
higiénico y de conservación de la leche y la aldehído-Reductasa componente de la
leche, cuya actividad se utiliza para controlar el tratamiento térmico
(pasteurización, esterilización) a que se ha sometido la leche.
2.2. Prueba de la Reductasa
En un tubo de ensayo, grande y
estéril, se vierten asépticamente 20 ml de leche (dentro de las 4 horas
siguientes a la extracción de la muestra) y 1 ml de solución de azul de
metileno, obtenida por mezcla de 5 ml de su solución alcohólica saturada con
195 ml de agua. Se tapa el tubo y se calienta 5’ a 37°C, luego se invierte
varias veces para asegurar la distribución uniforme de la crema y se incuba a
37°-38°C en posición vertical, invirtiendo cada media hora y protegido de la
luz solar o eléctrica. Se mide el tiempo desde que se inicia la incubación
hasta que por lo menos los 4/5 de la leche se han descolorado. La leche cruda y
la pasteurizada deben resistir más de 5½ horas sin descolorarse y la destinada
a la pasteurización, por lo menos 3 horas.
Según otra técnica, se colocan en un
tubo con tapa atornillada (en las Pruebas de reductasa todo el material usado
debe ser estéril) 10 ml de leche y 1 ml de una solución de 1 tableta con 8,8 mg
de tiocianato de azul de metileno en 200 m1 de agua destilada estéril.
El tubo, llevado a 36°C, se tapa y se invierte 3 veces. Si después de 30
minutos de incubación a 36°C la mezcla sigue azul, se sigue 1, 2 o más horas
hasta que 4/5 del volumen estén descolorados
3. Procedimiento
Para más detalles acerca del procedimiento, haga clic en el siguiente link:
4. Resultados y Discusiones
4.1 Resultados Prácticos
LECHE ENTERA
La leche entera
vuelve a su color blanco inicial con el transcurrir del tiempo.
DISCUSIÓN
La presencia de microorganismos en la leche y por su acción reductora, se
produce una modificación del color del azul de metileno, pasando de color azul
intenso a azul claro, pudiendo desaparece totalmente de acuerdo a la carga
microbiana presente. Una leche con un contenido bajo en microorganismos, no
modifica el tinte azul del colorante o tarda mucho tiempo en modificarlo. Ser
considera que en la leche natural fresca el tiempo de decoloración del
colorante en la prueba de la reductasimetría debe ser superior a las dos horas
6 CONCLUSIÓN
Determinamos la
reductasa lo cual nos permitió obtener un número aproximado de microorganismos
presentes en la leche cruda estimando el
tiempo que tardo en la reducción del
colorante azul de metileno que es un indicador de óxido-reducción
Llegamos a la conclusión de que la leche si estaba con
presencia de bacterias la pérdida del
color azul se dio 2.45 horas por lo que
podemos definir que la leche no estaba muy contaminada por el tiempo que se
tardó, pero tardo menos que una leche certificada la cual demoraría mucho más
de 5 horas
6. Bibliografía
6.1 Linkografía
- DETERMINACIÓN
DE LA REDUCTASA EN LA LECHE
15 - Junio - 2014
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